温州医学电生理膜片钳供应商
膜片钳的应用:对药物作用机制的研究:在通道电流记录中,可分别于不同时间、不同部位(膜内或膜外)施加各种浓度的药物,研究它们对通道功能的可能影响,了解那些选择性作用于通道的药物影响人和动物生理功能的分子机理。这是膜片钳技术应用较普遍的领域,既有对西药药物机制的探讨,也普遍用在重要药理的研究上。如开丽等报道细胞贴附式膜片钳单通道记录法观测到人参二醇组皂苷可抑制正常和“缺血”诱导的大鼠大脑皮层神经元L-型钙通道的开放,从而减少钙内流,对缺血细胞可能有保护作用。陈龙等报道采用细胞贴附式单通道记录法发现乌头碱对培养的Wistar大鼠心室肌细胞L-型钙通道有阻滞作用。膜片钳和电压钳的区别:膜电位固定的方法不同。温州医学电生理膜片钳供应商
膜片钳法的各种模式:膜外面向内模式:从全细胞模式将膜片微电极向上提起可得到切割分离的膜片,由于它的细胞膜内侧面面对膜片微电极腔内液,膜外面自然封闭而对外,所以这个模式被称为莫外面向内模式。开放细胞吸附膜内面向外模式:将细胞吸附模式的膜片以外的某部位的胞膜进行机械地破坏,经破坏孔调控细胞内液并在细胞吸附状态下进行内面向外的单一离子通道记录。穿孔囊泡膜外面向外模式:从穿孔膜片模式将膜片微电极向上提起,便在微电极尖锐端处形成一个膜囊泡,如果条件较好,此膜囊泡内不只有细胞质因子还可有线粒体等细胞器存在。东莞医学脑定位膜片钳应用膜片钳技术的应用范围:膜片钳技术在通道中的研究。
膜片钳实验常见问题及解决方法:膜片钳实验难度大、技术要求高,要掌握有关技术和方法虽不是很困难的事,但要从一大批的实验数据中,经过处理和分析,得出有意义、有价值的结果和结论,就显得不那么容易,有许多需要注意和考虑的问题,包括减少噪音,避免电极前端的污染,提高封接成功率,具体实验过程中还需要考虑如何选取记录模式,为记录特定离子电流如何选择电极内、外液,如何选择阻断剂、激动剂,如何进行正确的数据采集等许多更为复杂的问题,还需在科研实践中不断地探索和解决。
一种提高膜片钳实验效率的方法与流程:膜片钳技术是一种记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜上离子通道分子活动的技术。是用来研究单个离体的活细胞、组织切片或细胞膜片离子流的电生理实验技术。这项技术在可兴奋细胞如神经元、心肌细胞、肌纤维和胰腺细胞的研究中起至关重要的作用,也可用于研究特殊制备的巨型球状体中的细菌离子通道。传统膜片钳技术对实验人员的技术要求非常高,一般地,实验人员需要经过严格的长期的训练,才能准确且快速的操作。膜片钳使用的注意事项:安装玻璃微电极时,电极应与银丝平行,防止刮蹭银丝电极。
膜片钳技术操作方法:实验前准备:打开总电源及稳压电源,打开电脑、放大器,并开启程序软件,新建数据文档并准备开始试验;用P97微电极拉制仪拉制玻璃电极若干备用;检查减震台的减震效果,打开倒置显微镜,监视器和微操备用,取-血细胞将其中玻片取出放入小培美血中,置于倒置显微镜下,于低倍镜下寻找状态良好的细胞,并转入高倍镜下再次确认细胞状态及贴壁情况等,确认细胞后,取电极一根充灌电极内液,弹出气泡,然后套入银丝并插入探头中扭紧旋钮,用注射器管道给电极一点点正压,将电极入水,入水后,查案入水电阻,要在4-8M左右的电极才可以使用,通过调节微操,使电极不断向下接近细胞,待电极尖锐端逐渐变清晰并且将要接近细胞时停止向下,然后把电极移到细胞上方调节放大器上的调零旋钮以保证基线在零水平。膜片钳是一种能够直接观察单一的离子通道蛋白质分子对相应离子通透难易程度等特性的一种实验技术。黄山神经生物学膜片钳成像
膜片钳技术的应用范围:在神经科学中的研究。温州医学电生理膜片钳供应商
膜片钳技术本质上也属于电压钳范畴,两者的区别关键在于:①膜电位固定的方法不同;②电位固定的细胞膜面积不同,进而所研究的离子通道数目不同。电压钳技术主要是通过保持细胞跨膜电位不变,并迅速控制其数值,以观察在不同膜电位条件下膜电流情况。因此只能用来研究整个细胞膜或一大块细胞膜上所有离子通道活动。目前电压钳主要用于巨大细胞的全性能电流的研究,特别在分子克隆的卵母细胞表达电流的鉴定中发挥着其他技术不能替代的作用。温州医学电生理膜片钳供应商
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