温州济南RNA提取试剂

提取RNA的详细步骤：首先，将研钵晾干够，倒入1/3体积的液氮，加入0.2g均质的植物材料，充分研磨后转入一个含有300微升GMT的1.5ml的离心管中，摇匀。然后，加入30微升2mol/lNaAc进行摇匀，加入300微升酸酚摇匀，加入100微升的氯仿摇匀。然后，在四摄氏度12000r/min下离心二十分钟，吸取上清液的3/4，加入等体积的异丙醇，于冰上放置十五分钟。然后，在四摄氏度12000r/min下离心十分钟，将沉淀悬浮于含100微升的4mol/lLiCl小试管中，于-20摄氏度下放置过夜。然后，在4摄氏度13000r/min下离心10-15min，将沉淀溶于0.4mlDEPC处理水中，加入1/2体积氯仿和1/2体积酸酚，摇匀，进行抽提，在4摄氏度13000r/min下离心五分钟。将上清液中加入等体积的氯仿摇匀，进行抽提，在四摄氏度13000r/min下离心五分钟，上清液中加入1/10体积3mol/l NaAc和两倍体积的午睡乙醇与-20摄氏度放置一小时。所提取的RNA完整性好、纯度高，可用于分子生物学后实验。温州济南RNA提取试剂

RNA提取围绕DEPC的玄学。单纯高压过的蒸馏水或超纯水，基本可以视为无核酸酶活性等级的水。Thermo Fisher公司曾经做一项实验来说明这个问题。在PBS中加入不同浓度RNase A，高压或不高压，后溶解P-32标记RNA 探针。较后数据显示，除非原始的RNase A的浓度高达1 µg/ml，否则常规高压过的水，基本检测不出RNase A活性。当然，Thermo的科学家也很谨慎，说这个结论*适用于RNase A，不能推广到其他的RNase类型。不使用DEPC来处理RNA实验相关试剂和耗材，因为太费劲，而且DEPC还有毒性。相关的液体试剂，我会使用从公司购买的Nuclease-free的水来配制。没有很贵，一小瓶够用很久。很多时候买各种其他试剂，比如酶、siRNA等，也都会送这样的水。在耗材方面，直接使用大公司的离心管和吸头，根本不用担心核酸酶的问题。合肥正规RNA提取试剂产品介绍RNA的碱基配对规则基本和DNA相同，不过除了A-U、G-C配对外，G-U也可以配对。

Trizol法是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，压制细胞释放出的核酸酶。虽然Trizol里面含有RNA酶压制剂的，1ml的Trizol一般较多只能裂解100mg的组织。但是如果组织过量，Trizol无法完全浸润组织无法完全裂解组织，多余组织内的RNA酶等物质会导致RNA的降解。这是RNA降解的很重要的原因。同时，由于RNA容易降解，在实验过程中一般都要求口罩的，避免组织的污染。同时选用的无RNA酶的进口泵头、EP管以及DEPC水，在提取过程中，一定要时刻提醒自已RNase Free-RNase Free-RNase Free,实验就成功一半啦~

RNA提取：预备工作RNA酶（Rnase）是导致RNA降解较主要的物质。此酶非常稳定，在一些极端的条件下只可暂时失活，但限制因素去除后又迅速恢复活性。常规高温高压灭菌方法和蛋白压制剂不能使所有的Rnase完全失活。1.它普遍存在于人的皮肤上，因此制备RNA时必须戴手套。2.RNase的又一污染源是取液器。根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用以DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，可基本达到要求。3. 塑料制品、玻璃和金属物品的处理。好的试剂盒价格比较贵，在实验室可以根据自己的实验需要来定夺试剂盒的使用。

RNA提取实验前准备：研钵150度烘烤4小时，离心管、吸头用DEPC处理；操作过程更是要求必须在超净台进行或者在RNA提取专区进行，离心机、移液器、试剂**，带口罩、帽子，屏住呼吸、不说话，带乳胶手套并要时常更换。这样做无非是听说RNase很不好（书本上或者网上“RNA提取注意事项”），无处不在，所以到处都要擦的bling bling才能做实验，好像空气中的RNase都能炸出汁的样子。RNase主要来自样品的细胞。如果按比例来说的的话，细胞内源性的RNase占99.9%，实验环境的RNase占0.01%，一般可以忽略不计。所以，研钵洗干净、烘干即可。买点无酶的吸头、离心管，找一个普通的试验台，穿好实验服戴好手套，保护好自己就好。口罩爱带不带，做实验时高冷一点，不要指点江山，唾沫横飞即可。如果做实验时必须要用到trizol（主要成分苯酚）、氯仿、B-巯基乙醇等易挥发有毒试剂时，带口罩可以保护自己哦。β-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。温州济南RNA提取试剂

排除其它核酸分子（DNA）的污染。温州济南RNA提取试剂

RNA提取试剂盒原理：该EpiQuik™总RNA提取试剂盒提供了一种快速，简单，经济有效的方法，可从全血，哺乳动物细胞，细菌细胞和菌类细胞中分离总RNA。优化的洗涤剂和离液盐用于裂解细胞并灭活核糖核酸酶。专门的高盐缓冲系统允许RNA物质基团结合到旋转柱的玻璃纤维基质上，同时使污染物通过柱被有效地洗去。纯的RNA用RE缓冲液洗脱，不用酚提取或醇沉淀。 RNA提取试剂盒特点：1、快速程序在25-40分钟内提供高质量的总RNA。2、即用型RNA，可在绝大多数下游应用，例如RT-PCR，cDNA合成，Northern Blotting，Differential display，Primer Extension， mRNA selection。3、适用样品：全血，哺乳动物细胞，细菌细胞和菌类细胞（样品起始量：300μl全血，10 ^ 7个哺乳动物细胞，10 ^ 9个细菌细胞和10 ^ 8个菌类细胞。总共可以使用该试剂盒进行50次标准提取。总RNA的产量可达30μg。产量可能因样品类型而异。）温州济南RNA提取试剂

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